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上海IgM纯化

时间:2020-8-13 15:54:24  来源:http://sh.saiboerbio.com/product607413.html

大多数IgM纯化类上海抗体是优球蛋白不溶于水,故可用双蒸水透析IgM纯化。对那些溶于水的IgM纯化类上海抗体可用饱和硫酸铵沉淀。沉淀后可以采用颗粒排斥层析法(凝胶过滤)进一步纯化。

颗粒排斥层析,通过IgM纯化所得上海抗体可用于Ig分子片段的制备、FITC、生物素或同位素标记。

一、材料和试剂

1. 抗血清,杂交瘤腹水或其上清,硫酸铵沉淀粗提γ球蛋白。

2. 含0.02%NaN3 的硼酸缓冲液,PBS。

3. 透析袋;26mm×900mm层析柱。

4. 适当筛孔的颗粒排斥(SE)凝胶(AcA Ultragel-或Sephacryl S-200(Pharmacia LKB)。

5. 蛋白透析、SE层析和SDS-PAGE所需的其他试剂和器材。

二、操作步骤

1. 待提取样品11,000~13,000r/min(15,000~20,000×g),4℃或室温离心,除沉淀。

2. 上清液对双蒸水透析4℃24h。

3. 11,000~15,000r/min 4℃ 或室温离心1h,留沉淀。

4. 制备SE凝胶层析柱,以硼酸缓冲液平衡。

5. 将步骤3沉淀或饱和硫酸铵粗提γ球蛋白以3~5ml硼酸缓冲液溶解,缓慢加样。

6. 以硼酸缓冲液洗脱蛋白质,并收集100管(每管为柱床体积的1%),IgM纯化在洗脱液的di一个蛋白峰。

7. 收集Ig蛋白峰,分别合并,透析浓缩,紫外分光光度计OD 280nm测定Ig含量,SDS-PAGE鉴定IgM纯度。

8. 以1~20mg Ig/ml硼酸缓冲液置4℃或-70℃保存。


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