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上海AU标记抗体与检测指南

时间:2020-4-17 3:00:00  来源:http://sh.saiboerbio.com/news353655.html

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对于初次接触AU上海标记抗体的新手而言,面对文献中发表的诸多标记方法,难免产生困惑。到底这些AU标记抗体方法的关键点是什么?在具体情况下该采用何种标记方法?根据传统的AU标记抗体方法,我们有必要对化学修饰的原理有一个基本的了解,因为抗体和/或标记物在进行标记(结合)反应前需要化学活化。

AU标记抗体小编的这篇文章可让您学习了解常见AU标记抗体方法的基本知识。同时还介绍了 Lightning-Link抗体标记技术,标记的手头操作时间仅需短短的30秒!

抗体与标记物

抗体广泛应用于多种免疫分析中,用于检测和定量抗原。直接识别抗原的抗体被称为上海一抗(primary antibody),赋予检测的特异性。同时,在检测中还需加入标记物(详见后文“间接标记法 Vs.直接标记法”),标记物的加入赋予可检测性。表1中列出了一些常用的免疫分析技术,及可能使用到的标记物。


直接检测法 Vs.间接检测法

检测技术可分为两大类:直接法和间接法。对于直接检测法,标记物通过共价键连接到一抗上。而对于间接检测法,标记物则是共价连接到与一抗特异性结合的上海二抗上。

在间接法中,检测由两个部分组成:首先,用未AU标记抗体的一抗进行孵育(通常1小时),(若存在抗原)部分抗体与抗原结合,未结合的抗体则通过洗涤去掉,然后加入标记二抗。再次孵育(通常1小时),洗涤去掉未结合的二抗。然后对结合在抗体上的标记物进行量化。若有抗原存在时,标记物通常导致有色物质的生成或某一个波长的发射光量增加。当无抗原存在时,则无一抗的结合,也无二抗试剂的结合,因此无信号产生。

在直接法中,标记物直接与一抗共价结合,因此仅需一轮孵育及洗涤步骤,而间接法则需要两轮孵育及洗涤步骤。直接法简化了试验的流程,但检测的灵活性降低。下表2列举出了直接法/间接法的主要利弊。

抗体标记方法

抗体和所有蛋白一样,是由氨基酸残基组成的。蛋白的氨基基团(包括赖氨酸侧链和氨基端)通常被用于共价链接标记物。尽管在文献中报道了多种多样的标记方法,但实际上只有4种zui常用的标记方法,且不同之处仅在于标记物被转换为反应性衍生物的方式。无论何种方法,几乎毫无例外的都是将标记物共价连接到抗体分子的赖氨酸残基上。

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